Material: plasma PPT BD + sangue total EDTA

Preparo: * DOCUMENTO OBRIGATÓRIO:
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Sessão de downloads site Alvaro: REQ02032 – Questionário de genotipagem para o vírus HIV 1.

Interpretação:

A genotipagem (sequenciamento de DNA) é o método de escolha para a identificação de mutações nos genes da protease e da transcriptase reversa do HIV-1, podendo predizer um possível fracasso terapêutico e relacionando que drogas não devem ser utilizadas na terapia anti-retroviral. Os resultados são interpretados em associação a dados referentes a tratamentos prévios e outras informações clínicas e laboratoriais relevantes.

Sinônimos: Resistência a inibidores de protease e inibidores de transcriptase reversa; detecção de mutações associadas a resitência aos inibidores da protease e da RT.

Indicação: Pacientes infectados por HIV-1 que exibem fracasso à terapia anti-retroviral e apresentam níveis de RNA viral superiores a 1.000 cópias por mililitro de sangue. Amostras com valores inferiores podem apresentar quantidades insuficientes de cDNA para as reações de amplificação e sequenciamento nucleotídico. Heterogeneidade genética viral e inibidores endógenos também podem impedir a obtenção de resultados favoráveis. O paciente deve estar usando a medicação pois as mutações deixam de ser detectadas após a suspensão do medicamento.

Interpretação clínica: O teste é capaz de detectar mutações que estejam presentes em pelo menos 30% da população viral presente no paciente.
O resultado deve ser interpretado em conjunto com a história dos medicamentos usados pelo paciente. Quando uma droga é suspensa, as mutações que geram resistencia a ela podem diminuir proporcinalmente em relaçao ao virus selvagem, e por este motivo deixam de ser detectadas. As cepas resistentes permanecem no individuo porém em proporção menor que a sensibilidade do teste que é de 30%. A proporção da cepa resistente aumenta quando a droga é reintroduzida. Por este motivo o teste indica as drogas em que o paciente não vai responder (para as quais mutações foram detectadas) do que as drogas que ele vai responder.

Sugestão de leitura complementar:
Shafer RW. Genotypic testing for human immunodeficiency virus type 1 drug resistance Clinical Microbiology Reviews 2002; 15:247-77.

Coleta:

* Coletar 1 tubo de sangue total-EDTA e 1 tubo de plasma-PPT, enviar refrigerado.

* Processamento da amostra coletada em PPT:
O material deve ser centrifugado logo após a coleta por 10 minutos a 1.100G* e enviado refrigerado. Enviar os tubos PPT sem manipulação, ou seja, no tubo primário.
Os materiais que chegarem em temperatura ambiente serão considerados como LIMITADOS para a quantificação e/ou detecção viral e a interpretação do resultado será restrito.

*3137 RPM (centrifuga com raio de 10cm)
*2480 RPM (centrifuga com raio de 16cm)
*2118 RPM (centrifuga com raio de 22cm)